實(shí)驗(yàn)原理 葉綠素廣泛存在于水果、蔬菜等綠色植物組織中,與植物細(xì)胞中的蛋白質(zhì)結(jié)合形成葉綠體。當(dāng)植物細(xì)胞死亡時(shí),葉綠素就會(huì)釋放出來(lái)。游離葉綠素非常不穩(wěn)定,對(duì)光和熱敏感;在酸性條件下,葉綠素形成綠褐色脫鎂葉綠素,在稀堿液中可水解成亮綠色葉綠素。酸式鹽以及植醇和甲醇。高等植物中的葉綠素有兩種:葉綠素a和b,均易溶于乙醇、丙酮和丙酮。 葉綠素含量的測(cè)定方法有很多,其中有: 1、原子吸收光譜法:通過(guò)測(cè)定鎂的含量間接計(jì)算出葉綠素的含量。 2、分光光度法:用分光光度計(jì)測(cè)量葉綠素提取物在最大吸收波長(zhǎng)處的吸光度值,然后可以利用朗伯-比爾定律計(jì)算提取物中各色素的含量 葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有最大吸收,兩條吸收曲線(xiàn)在652nm處相交。因此,分別測(cè)定了提取物在645nm、663nm和652nm波長(zhǎng)處的吸光度值,可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式分別計(jì)算出葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素的含量。 儀器、原材料和試劑儀器儀器分光光度計(jì)、電子頂裝天平(靈敏度0.01g)、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦拭紙、滴管。原料 新鮮(或干燥)植物葉試劑 1. 96% 乙醇(或 80% 丙酮) 2. 石英砂 3. 碳酸鈣粉。 操作步驟 取新鮮的植物葉子(或其他綠色組織)或干燥的材料,擦去組織表面的污垢,去除中脈,切塊。稱(chēng)取2g新鮮切碎的樣品,放入研缽中,加入少量石英砂、碳酸鈣粉和3ml 95%乙醇,研磨成均質(zhì)漿液,加入10ml乙醇,繼續(xù)研磨至組織變白.靜置 3 到 5 分鐘。取1張濾紙放入漏斗中,用乙醇潤(rùn)濕,將提取液沿玻璃棒倒入漏斗中,濾液倒入100ml棕色容量瓶中;用少量乙醇沖洗研缽、杵和殘留物幾次,最后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小S玫喂芪ヒ掖迹瑢V紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直到濾紙和殘?jiān)鼪](méi)有綠色為止。最后用乙醇定容至100ml,搖勻。取葉綠體色素提取物,在665nm、645nm和652nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以95%乙醇作為空白對(duì)照。 計(jì)算 根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理中提供的經(jīng)驗(yàn)公式,分別計(jì)算植物材料中葉綠素a、b和總?cè)~綠素的含量。
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