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谈谈叶绿素的提取和分离方法

时间:2023-02-21 14:00:02   访客:1853

提取:

叶绿素提取的准备工作在室温为 25°C 的半暗室中进行。提取步骤如下:
(1)取1000克新鲜绿叶,放入韦伯斯特搅拌机中粉碎。
(2)将1000克压碎的绿叶提取到加入少量碳酸钙的丙酮(温度20℃)中,直至过滤和洗涤的叶碎片无色。
(3) 将过滤后的丙酮提取液放入盛有1L石油醚和100mL丙酮的漏斗中,加入蒸馏水轻轻摇动直至分层。弃去水层中的大部分丙酮和水溶性杂质,只剩下石油醚溶液。
(4)石油醚溶液再次用蒸馏水纯化后,用含石油醚和0.01g草酸的200mL 80%甲醇溶液洗涤5次以上,最后得到黄绿色悬浮液。
(5)将悬浮液用无水硫酸钠干燥,浸润于3cm厚的蔗糖粉制成的柱子中,然后用石油醚洗涤沉淀的色素,除去类胡萝卜素,使其仅含天然叶绿素。
(6) 含有天然叶绿素的蔗糖柱分为两层,绿色层有4-10mm的叶绿素b层,另一层蓝色层有2-6mm的叶绿素a层。
(7) 将位于蓝层中间的部分(约一半蓝层)放入乙醚中,过滤悬浮液,洗脱,用蒸馏水洗涤,用硫酸钠干燥,然后用容器过滤后,叶绿素得到一个。
(8)将(6)中绿色层中间部分去掉,迅速放入乙醚中过滤洗脱,制成叶绿素b乙醚溶液。
分离:
色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物,尤其是痕量分析的重要方法。果蔬中的色素主要有脂溶性胡萝卜素、叶黄素、叶绿素和水溶性花青素。在提取实验中,我们可以利用相似混溶原理过滤掉水溶性花青素,然后利用薄层色谱、柱色谱、高效液相色谱分离胡萝卜素、叶黄素和叶绿素。颜料的极性依次减弱,可适当选择单一有机溶剂或不同比例的混合溶剂作为展开溶剂和洗脱液,以确定最佳的优化分离条件。


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